🧪跑IL-1β的WB，最容易栽的坑就是只看见31kDa的Pro-IL-1β前体，17kDa的Cleaved成熟体死活出不来。这真不是抗体没孵好，核心原因是你没完成炎症小体激活步骤，Pro-IL-1β没被Caspase-1剪切，当然只能看到前体。
💡想拿到17kDa条带，样本处理必须严格两步走：先用LPS (1 μg/mL, 4-6 h)预刺激，再加ATP (5 mM, 30 min)诱导。参考 Biomolecules发表的IL-1β研究实验设计（图示为该研究中的IL-1β条带结果），就是这么处理的，文中用了Abmart同款PC0812抗体，一抗1:1000稀释，二抗1:5000稀释，可根据实际信号强度按需调整。
⚠封闭这里有个绝对禁忌：千万别用脱脂牛奶！牛奶里的酪蛋白会产生高背景，直接把17 kDa目标条带完全掩盖掉。
📝另外还有两个实操注意点。第一，别只跑细胞裂解液，必须同时跑浓缩后的培养上清，这样才能全面评估胞内前体与胞外成熟体的剪切状态。第二，这个蛋白存在糖基化修饰，实际跑出来的条带位置可能略高于理论分子量，别误认成杂带就行。
